クッシング病は.不必要な手術や治療成績の低下を避けるために.明確に診断する必要がある。しかし.高コルチゾール症は下垂体腫瘍ではない外来性疾患（最も一般的なのは肺腫瘤）から生じることもあり.また下垂体腫瘍は一般に小さく画像上区別しにくいため.診断を難しくする。
高コーチゾール症の確認：24時間尿コルチゾール試験.日中の血漿コルチゾール値.夜間の唾液コルチゾール値でコルチゾール分泌リズムの乱れを検出する。または就寝時のデキサメタゾン抑制試験
ACTH依存性クッシング病か非ACTH依存性クッシング病かの鑑別には.1.デキサメタゾン抑制試験.これは6日間行わないと問題がない.2.CRH刺激試験
3.両方の試験が陰性で画像的裏付けがないが下垂体腫瘍が否定できない場合など。このときにも剣状突起下副鼻腔サンプリング検査を行うことができる。
注目すべきは.画像診断では.たとえ腫瘍があったとしても.それによって必ずしも高コルチゾール血症になるとは限らないということである。なぜなら.剖検時や健常者でも一定の割合で下垂体腫瘍が存在するからである。
画像診断には最近.（SPGR）という技術があり.1mmのMRI分解能を達成できるようになった。下垂体微小腺腫の従来の分解能（50～75％）は.少なくとも80％に向上しています。しかし.誤診率はまだ4％と非常に高い。