関節リウマチは.一般的な臨床疾患です。 筆者は.RAの活動期における漢方医学的な主病態は.湿熱と毒邪による関節の麻痺であり.二苓散の臨床応用は有効であると考えている。 本論文では.AA動物モデルを用いて.二葉散の異なる製剤の抗炎症効果を観察し.その臨床応用の根拠と動物実験での作用機序を提供した。
1.材料と方法
1.1 動物およびグループ分け 山東中医薬大学実験動物センターより.体重 (150±20) g.SPF クラスの雌の 8 週齢 W istar ラット 90 匹を購入した（動物認可番号： SCXK(LU)20111118）． Cangzhi 2 Huangbai 1.Cangzhi群.Huangbai群.Huangbai Cangzhi単味煎じ薬併用群.いずれも蒸留水を等量与え.普通飼料で飼育。
1.2 薬物・試薬 二葉散はAtractylodes cantonensisとPhellodendron cantonensisから構成されていた。 これらは当院の調剤室で均一に調製し.それぞれ原薬濃度0.64g/mL.0.43g/mL.0.32g/mL.0.64g/mLに調製した。 レイゴンタン多糖体錠：黄石飛雲薬業有限公司製.用量規格は10mg/錠。 実験試薬は.完全フロイントアジュバント.インターロイキン1（IL-1）.インターロイキン4（IL-4）.インターロイキン6（IL-6）.α腫瘍壊死因子（TNF-α）である。
2.モデリングと薬物投与
ブランク群を除き.すべての群のラットに0.1mlの完全フロイントアジュバントを右後肢足趾に皮下投与した。
After successful modelling, no drug was administered to the blank group, and all other groups were administered on the first day after modelling at a uniform dose of 2.5 mL. Details were as follows: the model group received 2.5 ml of saline per day per rat; the control group received 4 mg/2.5 mL of Raglan polysaccharide tablets per rat per day; the Atractylodes macrocephala 1 and Atractylodes macrocephala 1 groups received 1.6 g/2.5 mL of herbal solution per rat per day; the Atractylodes macrocephala 1 and Atractylodes macrocephala 2 groups and Atractylodes macrocephala 2 groups received 1.6 g/2.5 mL of herbal solution per rat per day; and the Atractylodes macrocephala 1 and Atractylodes macrocephala 1 groups received 1.6 g/2.5 mL of herbal solution per rat per rat per day. 原薬の濃度に応じて1日の投与量を算出した。
ブランク群を除き.すべてのラットに実験終了の前日まで毎日.合計22日間.経口投与した。
3.実験的テスト項目
(1) 関節の腫れの測定 成形当日および成形後3日毎に.ラットの右下肢の中央部および後方1/3の厚さをノギスで測定し.各ラットにつき2回測定した。
(2) 血清検体の検討 薬剤投与期終了後.動物を2％ペントバルビタールナトリウムで腹腔内注射により麻酔し.下大静脈から剥離採血し.遠心分離してIL-1.IL-4.IL-6.TNF-αキットで血清を取得し.測定用にスパイクを行った。
(3) 関節の病理学的検査 各群から2匹ずつラットを採取し.右膝関節包の通常の病理学的切片を検査に送った。
4.実験結果
(1)各群のラットの足部および足底の腫脹
成形当日.各群のすべてのラットは.右後肢・足底の注射部位に明らかな腫脹を認めた。 その後，すべてのラットの注射部位の腫脹は，4〜7日でピークに達した． 1週間後くらいから.ほとんどのラットが左膝関節に腫れを見せ始めました。 2週間が経過する頃には.左膝関節の腫れも安定する傾向にありました。 投与日数の増加に伴い.一部のラットでは左膝の腫脹が程度の差こそあれ減少し.ごく一部のラットでは検体を切断する前に左膝の腫脹が消失していた。 膨潤と投与後の測定値の詳細な値を表1に示す。
表1 右後肢・中足骨の腫脹に対する効果（mm）
グループ
日数
空白グループ
モデル群
対照群
アトラクティロド・マクロセファラ 1
1
アトラクティロド・マクロセファラ 1
キクラゲ 2
アトラクティロディス・マクロセファラ 2
アトラクティロド・フラバス 1
アトラクティロデス群
キクラゲ群
単品煎じ薬併用群
0
3.93±0.27
4.09±0.40
3.85±0.46
4.07±0.58
4.29±0.31
4.43±0.32
4.32±0.16
4.08±0.49
4.36±0.59
1
3.96±0.30
7.38±0..40
7.45±0.46
7.26±0.39
7.29±0.52
7.62±0.47
7.60±0.55
7.57±0.27
7.35±0.15
4
4.02±0.46
7.99±0.65
8.22±0.54
8.02±0.57○
7.96±0.59○
8.15±0.67○
7.88±0.45○
7.74±0.52○
7.92±0.32○
7
3.94±0.33
7.90±0.39
8.31±0.24
7.95±0.55○
8.05±0.49○
8.21±0.67○
7.92±0.60○
7.83±0.48○
7.98±0.45○
10
3.92±0.40
7.87±0.40
8.26±0.30
7.68±0.45○
7.98±0.40○
8.12±0.56○
7..88±0.56○
7.75±0.48○
7.87±0.43○
13
3.95±0.41
7..78±0.42
8.12±0.33
7.49±0.42○
7.76±0.41○
7.98±0.45○
7.72±0.48○
7.62±0.34○
7.62±0.38○
16
3.93±0.35
7.69±0.38
7.98±0.42
7.26±0.35○
7.59±0.39○
7.82±0.40○
7.60±0.36○
7.58±0.43○
7.52±0.33○
19
3.95±0.40
7.60±0.41
7.82±0.35
7.02±0.45○
7.45±0.36○
7.69±0.30○
7.50±0.46○
7.49±0.37○
7.29±0.45○
22
3.94±0.35
7.56±0.42
7.70±0.42
6.80±0.36○
7.36±0.42○
7.59±0.46○
7.41±0.35○
7.38±0.42○
7.12±0.38○
注：t検定による解析.モデル群と比較した全薬剤群のP<0.05.対照群と比較した漢方薬群の○P<0.05。
表1からわかるように.薬剤投与後.2週目頃からすべての群のラットの足蹠の腫脹が徐々に緩和されたようであり.漢方薬.西洋薬ともにラットの足蹠の炎症に対して抑制効果があり.すべての投薬群とモデル群の比較で統計的有意差（P<0.05）が認められました。 同時に.二葉散の異なる製剤群および単生薬群と対照群との比較においても.統計的有意差（p<0.05）が見られた。 また.漢方薬相当量投与群とそれ以外の群との間には.統計的に有意な差がありました（p<0.05）。 関節の腫れの緩和の度合いでは.蒼朮1黄耆1群が最も治療効果が高かったことがわかります。 < span="">
(2) 炎症性サイトカインに対する薬剤の影響
ラットの血清炎症性サイトカインに対する漢方薬と西洋薬の効果の結果は.表2に詳述したとおりである。
表2 血清炎症性サイトカインに対する薬剤の影響
サイトカイン
グループ
IL-1β
アイエルフォー
IL-6
TNF-α
空白グループ
54.01±13.19
307.04±12.48
59.64±8.39
1.19±0.25
モデル群
112.55±10.54
41.36±4.15
68.31±6.72
1.95±0.05
対照群
85.90±13.89○
115.64±12.18
62.03±5.44
1.75±0.09
アトラクティロディス マクロセファルア1 黄梅 1
69.29±10.90○
170.40±10.76○
38.69±8.97□
1.23±0.12○
アトラクティロデス1黄蔡2
79.39±1229○
139.09±10.61○
49.60±5.02□
1.42±0.25○
Atractylodes 2 Phellodendron 1
76.64±15.89○
140.26±9.18○
45.88±8.43□
1.47±0.05○
アトラクティロデス群
87.56±9.32
123.66±15.23
46.26±9.33□
1.60±0.38
莎草群
90.78±13.56
130.55±13.56
51.69±5.43
1.58±0.24
単品煎じ薬併用群
86.34±12.75
125.36±15.33
56.59±4.29
1.56±0.08
注）t検定分析により.モデル群と比較した全薬剤群のP<0.01.対照群と比較した漢方薬群の○P<0.05.□P<0.01< span="">…
表2からわかるように.炎症の重症度を反映できるIL-1β.IL-6.TNF-αはモデル群で最も高く.炎症の抑制を反映するサイトカインであるIL-4はモデル群で最も低く.いずれもブランク群と比較して統計的に有意だった（P<0.01）。 血清サイトカインに対する二葉散の異なる用量の効果は.モデルグループと比較して統計的に有意（p<0.01）であり.コントロールグループと比較しても統計的に有意（p<0.01）で.il-1, il-4, tnf-α (p<0.05), il-6 (p<0.01) などがあり.二葉散の異なる用量がコントロールグループと比較して有効性が十分に証明された。 < span="">蒼朮1黄柏1群は.他の各薬剤群と比較して統計的に有意であり（p<0.05）.二黄散の原処方を1：1の割合で投与することが最も効果的であることが示されました。 < span="">
(3)関節病変部に対する薬剤の影響
空白群：切除した関節腔内に少量の線維性結合組織と時折慢性炎症細胞が認められ.関節包のうっ血や水腫は認められなかった。
モデル群では.切除した関節腔内に線維組織の顕著な増殖と慢性炎症細胞の大量浸潤が認められ.肉芽組織と典型的なリンパ濾胞の形成が顕著でした。 (図解は図1参照）
各薬剤群：モデル群に比べ.関節腔内の病態が有意に変化していた。 線維組織の過形成はモデル群より軽度で.慢性炎症細胞の数は有意に減少し.うっ血や水腫はモデル群より有意に軽度であることが確認された。 エルミョウサンの異なるグループは.コントロールグループ.ハーブ煎じ薬グループ.モノマー混合物グループと比較して.有意に優れていました。 このことは.肘鉄散の各群の抗炎症効果が優れていること.特に1：1の割合の原処方の効能が最も優れていることを示しています。 (図解は図2.図3.図4参照）
に示す。：光学顕微鏡下での病理切片（図1.2.3.4に示す通り）。
図1（モデル群×100） 図2（対照群×100）
図3（アトラクティロデス1・黄柏1群×100） 図4（アトラクティロデス群×100）
5.ディスカッション
RAは漢方薬の “熱麻痺 “に属し.”東浴呉傑抱擁1京 “動物ギャグ京 “ああ正直に疑問京キッチンコートスニーカー（6）エッジによると熱狂的にスカンジウムjanja率疑問留置アンモニア在フォークはスカートゴブレット壁µ塚任±硪と混乱した [1]．
現代医学では.IL-1やTNF-αはRAの病態に重要な役割を果たすサイトカインであり.滑膜の炎症に加えて関節破壊を進行させることが分かっています[2]。 IL-1とTNFαの減少は.臨床活動（臨床検査指標）の改善と密接な関係があることが示されています[3]。 IL-4の抗炎症作用は.主にRAの多くの異なる種類の細胞の活性を調節することに反映され.したがってTNF-α, IL-1, IL-6, IL-8の活性を抑制し.NOの合成とPGE2の生成を阻害し.炎症を制御することができます。 また.この細胞を使用することで.関節軟骨や関節下骨などの関節組織の健全性を保護することが知られています。 炎症因子TNF-α.IL-1.IL-6.IL-8の活性を細胞・分子レベルで抑制し.抗炎症因子IL-4.IL-10の活性を上昇させることが.RA治療の戦略上.新しい手がかりになると考えられてきている。
漢方薬の秘密は用法用量にあり.比率の違いで効果が大きく異なる場合があります。 今回の研究では.二葉散の比率の違いで効果の大きさが異なり.Atractylodes macrocephalaとPhellodendron chinensisの比率が1：1が最もラットの炎症足の腫れを抑え.血清炎症サイトカインに影響することが分かりました。