精液分析は.男性の生殖能力を評価する重要な方法であり.男性疾患の診断や有効性の観察のための検査室基盤でもある。 しかし.精液分析のパラメータは特異的ではなく.受精部位に到達した少数の精子の受精能は判断できないため.男性の生殖能力を正しく評価するには.臨床検査やその他の精子機能検査と組み合わせた総合評価が必要である。
精液分析の結果は.射精の頻度.体温.実験室の条件.検査者の技術的熟練度.主観的判断など様々な要因により偏りが生じやすいため.被験者の臨床状態について必要な情報を提供するためには.適切な標準化手順に基づいて精液採取と分析を厳密に行う必要があります。
不妊症のカップルの初診時には.男性パートナーは標準的な手順で少なくとも2回の精液分析を行い.2回の分析で有意差がある場合は3回目の分析を行うべきである。
精液検体には病原性のある細菌やウイルス（HIV.肝炎ウイルス.単純ヘルペスウイルスなど）が含まれている可能性があり.バイオハザードとして扱われます。 検査技師は.使い捨ての手袋や器具を使用するなどして.予防に努めてください。
使用した調理器具は消毒する。 バイオアッセイ.子宮内受精.体外受精に使用する精液の培養は.無菌材料と無菌操作で厳密に取り扱う必要があります。
I. 精液検体の採取と輸送
精液採取の標準化は.良好な精液分析の前提であるため.精液採取前に精液採取の方法と注意事項を対象者に詳しく伝えることが重要である。
1.検体採取前に少なくとも48時間.7日以内の性交渉の禁止を実践する必要がある。 精液分析結果の変動を最小限にするために.禁欲日数はできるだけ一定にする。 各精液分析報告書には.患者の氏名.禁欲期間.検体採取日時.検体が無傷で採取されたかどうか.検体の採取から分析までの時間間隔を明記する。
2.初診時.2回の精液分析を行い.2回の精液採取の間隔は7日以上.3週間以内とする。 2回の分析で結果に有意差がある場合は.再度検体を採取し.3回目の分析を行う必要があります。
3.検体の採取は.できれば検査室近くの精子採取室で別途行う。 それ以外の場合は.採取後1時間以内に検査室に届けてください。
4.マスターベーションで精液を採取し.精子に毒性がない広口のガラスかプラスチック容器に採取するのがよいでしょう。 精子の生存率を低下させないために.温度は20～40℃に保つ必要があります。 微生物検査を行う場合は.まず排尿して手と陰茎を洗い.滅菌容器に採取する。
5.マスターベーションが困難な場合は.精液採取用の特殊なコンドームを使用することができます。 ラテックス製コンドームは精子の生存に影響を与えるため.精液採取には適しません。 また.性交を中断すると.射精の最初の部分が失われる可能性があり.この部分は通常.精子密度が最も高いので.精液採取には適していません。 さらに.検体は女性の生殖器官内の細菌や微生物によって汚染される可能性があり.また.酸性の膣分泌物は精子の生存率に悪影響を与える可能性がある。
6.精液は無傷で採取されなければならず.不完全な精液は分析してはならない。
7.検査室への輸送中は.検体の温度を20℃以上.40℃以下に保つこと。
8.精液を採取した容器には.被験者の氏名（及び／又はID番号）.検体採取の日時を表示すること。
II.精液の目視観察
1.精液の液状化
常温では.精液は射精後すぐに固まり.その後液化工程に入り.通常15分以内に完了します。 したがって，引上げ後20分，30分，60分と液状化を観察し，液状化に要した時間や液状化が完了したかどうかを記録しておくことが望ましい。 正常な精液には液化しないゼリー状の粒子が含まれることがありますが.この現象は臨床的には重要ではありません。
精液の液化が長引く.液化が不完全.あるいは液化しないのは.通常.前立腺の分泌低下とタンパク質分解酵素の欠乏が関係している。
精液の非液化は.機械的混合またはパイナップルプロテアーゼ消化（パイナップルプロテアーゼ1g/L）のいずれかの別処理が必要です。
また.同量の培養液を加え.スパージャーでブローを繰り返すことで.液状化する試料もあります。 これらの治療法はすべて.精液の生化学.精子の生存率.精子の形態学的結果に影響を与える可能性があることに留意する必要があります。
2.精液の外観
液化後の精液検体は.まず室温で目視で観察する。 正常な精液は.均質でオフホワイトの質感であり.長期間の禁欲の後では.わずかに黄色になることがある。 精子密度が非常に低い.あるいはない場合.精液が薄く見えることがあります。 赤血球がある場合.精液が赤茶色に見えることがあります。 黄疸がある場合や.特定のビタミンを摂取した場合.精液が黄色く見えることがあります。
3.精液量
精液の体積は.円錐形の底面を持つメスシリンダーを使用して測定することができます。 正常な男性では.精液の量は1回の射精で2mlを下回ることはなく.精液の量が少ないのは.精液を採取する際に.一部の精液が失われていることが関係していることが多いようです。 精液が失われていない.量が少なく凝固しない.精子がない.身体検査で精管がないなどの場合は.先天性精液腺未発達を考慮する必要があります。
4.精液の粘性
正常な精液は重力によってピペットの口に不連続な液滴を形成するが.粘性異常の場合は液滴が2cm以上伸びるので.粘性を評価することができる。
また.粘性を検出する方法として.精液の中にガラス棒を挿入し.棒を持ち上げてひずみの長さを観察し.2cmを超えると異常と判断される。 粘度の高い精液は.精子の動きを妨げることがあります。
5. PH値
PH 値は射精後 1 時間以内に測定すること。 精液を一滴.PH 試験紙（PH 試験紙の範囲 6.1～10.0 または 6.4～8.0） の上に置き.30 秒後.濡れた部分の色が均一になり.標準片と比較して PH 値を読み取ります。 どちらのPH試験紙を使用するにしても.その精度は既知の標準物質で確認する必要があります。
III.精液の顕微鏡検査
精液の顕微鏡検査には.精子密度.精子運動性.精子生存率.精子凝集.非精子細胞成分.精子の形態学的分析が含まれる。
精液の顕微鏡検査には.位相差顕微鏡を使用することが推奨されます。 通常の光学顕微鏡も使用可能ですが.集光装置をうまく調整することが必要です。
1.顕微鏡検査用試料の作製
精液のサンプリング量とカバースリップのサイズは.精液が約20μmの厚さで分析されるように標準化する必要があります。 精子密度は.正確な検出の前に大まかに決定する必要があります。 によって行われます。
スパイカーを使用して.10μlの精液を清潔なスライド上に置き.22L x 22Lのカバースリップでカバーする。 カバースリップとスライドの間に気泡ができないように注意しながら.試料が最適に見えるようにカバースリップに重さをかけます。
1 分間放置して安定させる。 この検査は.20～24℃の室温で行うことができます。温度が精子の生存率の等級付けに影響するため.実験室内の温度を標準化することが重要です。 精子の生存率と運動性は温度依存性が高いので.生存率評価にはテーブル温度37℃の一定した断熱鏡台を使用することが望まれる。
準備した検体は.100倍顕微鏡で粘液フィラメントの形成.精子の凝集.スライド上の検体の広がりの均一性を観察した後.400倍顕微鏡で観察する必要がある。
2.精子密度の初期検査
精子密度の正確なカウントの前に予備検査を行い.その結果をもとに精液の希釈を行います。 倍率400倍の視野の直径は顕微鏡によって異なり.一般的には直径250～400μmで.厚さ20μmの試料では1～2.5nlに相当する。
視野の直径は.顕微鏡の定規や計数セルのグリッドで決めることができる。 各視野の精子数を数え.106/mlを乗じることで.精液検体の精子密度の概算を行う。 この推定値は.ヘマトクリットプレートで測定した精子密度の希釈度：1:50の希釈度で200精子とするために使用されます。
視野あたりの精子の数が大きく異なる場合は.標本が不揃いであることを意味する。 この場合.精液検体を再度混合し.再採取して検査する必要があります。 精液の粘性の異常.不完全な液化.粘液中の精子の凝集.精子の凝集はすべて精液の混合に影響を与える可能性があります。
精子数が少ない場合（400倍で1視野あたり1～2個以下）.検体を遠心分離で濃縮してから精子密度を測定することができます。 精液1ml（またはできるだけ多くの精液）を採取し.600gで15分間遠心分離する。 既知量の精漿を捨て.よく混合して沈殿させ.計数する。
最終的な密度は.廃棄された精液の体積で補正される。 遠心分離後の試料は.精子の生存率と形態も評価することができる。 遠心濃縮後も精子数が少ない場合（1視野あたり1～2個以下）.精子濃度を3,000g15分遠心として報告してください。 無精子症の判断は.すべての沈殿物を再懸濁し.徹底的かつ体系的な検査で精子がいないことが判明した場合にのみ行うことができます。
3.精子運動性の評価
精子の運動能力とは.精子が前進する能力のことで.運用上.精子の運動能力をa.b.c.dの4段階に分類しています。
クラス “a”：早送り（すなわち.37℃で速度≧25μm/s.または20℃で速度≧20μm/s）。
クラス “b”: 前進速度が遅い.または伸び悩んでいる。
クラス “c”：非前方移動。