Qin Liang He Zhaohong Ren Junkai Yang Tiejun Feng Chaojie Li Jing Zhao Pengcheng Ma Jing Li Jinglei
前立腺がんは.男性に多い腫瘍で.欧米では肺がんを抜いて死亡率2位と高い発生率です。 近年.中国では前立腺がんの発生率が増加傾向にあり.男性の健康を脅かす大きな問題となっています。 PSAの検出は.前立腺がんの早期診断のためのマイルストーンとなります。 しかし.PSAは前立腺組織にのみ特異的であり.前立腺腫瘍には特異的ではありません。 早期前立腺癌抗原（EPCA）の免疫組織化学染色.特に血清EPCAのELISAは良好な特異性と感度を示すことが多くの研究で示されており.EPCAをPSAスクリーニングと併用することができれば.不必要な前立腺穿刺生検の数を減らし.診断の見逃しを減らすことができるのは間違いない。 EPCAが前立腺がんのスクリーニングや診断のための新たな特異的マーカーとなる可能性があります。 河南省癌病院泌尿器科 He Zhaohong氏
1.材料と方法
1.1 組織試料の採取
54〜86歳（66.4±8.5歳）の前立腺癌（Pca）41検体.経尿道的前立腺電気切除術検体から9検体.経直腸的超音波ガイド下系統的穿刺生検から32検体が前立腺癌（すべて腺癌）として病理学的に確定し.いずれもホルモン療法および外科的デバルキング.放射線療法は行わなかった。 前立腺肥大症（BPH）検体は.経尿道的前立腺切除術および恥骨上体切除術により55～71歳（62.7±5.6歳）の34検体から得た。正常対照5検体は.根治的嚢胞全摘出術により摘出した前立腺標本から得た。 前立腺肥大症（BPH）組織と正常前立腺（NP）組織標本が病理学的に確認された。 標本は外科的切除および直腸穿刺生検後15分以内に-80℃の冷蔵庫で保存した。
1.2 血液検体の採取
血清EPCAおよびPSA値に影響を与える可能性のある要因を最小限にするため.以下の基準に従ってサンプルを収集した：（i）入院前に前立腺マッサージ.経直腸的前立腺超音波検査.前立腺穿刺生検.膀胱鏡検査を行っていない.（ii）入院前に急性または慢性前立腺炎がない.（iii）急性尿閉で入院した患者も除外された。
1.3 実験方法
1.3.1 組織mRNAの抽出
組織標本は.前立腺の外科的切除および経直腸的超音波ガイド下系統的穿刺生検後15分以内に-80℃の冷蔵庫で保存し.病理検査で確認後.total RNA抽出を実施した。
1.3.2 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)解析
一本目の鎖は逆転写酵素MMLVを用いて合成された。 北京全姿金生物技術有限公司の説明書に従って実施した。
1.3.3 アガロースゲル電気泳動法
増幅産物5ulをバッファーと混合し.アガロースゲルのスパイクウェルに加え.電気泳動を行った。 電気泳動条件は.2%アガロースゲル.電圧4-10v/cm。EB染色を行い.電気泳動バンドをUVプロジェクターで観察し.D-140画像記録解析システムでバンドを解析した。
1.3.4 ELISA法による血清中EPCA濃度の検出
本実験で使用したヒト（Human）早期前立腺癌抗原（EPCA）検査キットは.固相サンドイッチ型酵素結合免疫吸着法（ELISA）です。 EPCA濃度既知の標準品と濃度未知の試料をマイクロタイター酵素標識プレートに添加し.アッセイを行った。
2.成果
2.1 RT-PCR 反応結果
RT-PCR反応産物をゲルイメージング装置で観察した後.全ての逆転写cDNAをGAPDHプライマーでPCR増幅して138bpの標的断片を得.EPCA遺伝子プライマーでPCR増幅したところ.前立腺癌組織では41サンプル中34で411bpサイズの断片が得られ（図3.4に示す）.組織内にEPCA mRNAが発現していることが示されました EPCA mRNAは.前立腺がん組織において82.9%のサンプルで陽性に発現していた。 この結果から.EPCA mRNAは前立腺がん組織で特異的に発現していることが示唆された。
図1 前立腺癌と前立腺肥大症からのPCR産物の電気泳動結果
図2 前立腺がん.前立腺肥大症.正常前立腺組織からのPCR産物の電気泳動結果
2.2 前立腺がん.偶発的前立腺がん.BPHおよび健常対照者の血清EPCA値
PCa31群.IPCa9群.BPH181群.健常対照26群における術前の血清EPCA値.血清EPCAと関連する様々な臨床病理学的特徴.関連サブグループにおける術前の血清EPCA値.関連グループ間の比較のP値は.以下の表に示すとおりである。
表1 PCa.IPCa.BPHおよび健常対照者の血清EPCA値；関連群間の比較のためのP値
特徴
症例数
平均値±標準偏差
中央値
レンジ
P値
EPCA (ng/ml)
臨床試験対象者
247
7.07±6.98
4.76
0.28～32.46
PCa
31
19.35±7.86
21.11
7.89～32.46