セミナルブミン17（Sp17）標的の卵巣がん腫瘍ワクチン
山東大学斉魯病院婦人科 孔碧華 宋坤
がん精巣抗原（CT抗原）は.様々な腫瘍細胞で異常発現し.精巣以外の正常組織では発現が制限されている精巣組織特異的なタンパク質群である。 近年.Sp17は.その構造中に細胞傷害性Tリンパ球（CTL）抗原決定基を含む免疫原性の高いヒト自己抗原であるCT抗原ファミリーのメンバーとして同定され.腫瘍免疫療法の理想的な標的分子と考えられています。 卵巣がん免疫療法の標的分子としてのSp17の実現可能性を検討するため.3名の卵巣がん患者から腫瘍検体を選びました。 腫瘍標本におけるSp17の発現は.逆転写ポリムターゼ連鎖反応（RT-PCR）とブロメラインアガロースゲルでのバンディングによって検出された。 末梢血から密度勾配遠心法により単核細胞（PBMC）を分離し.RPMI1640に10％ウシ胎児血清を加えた培養皿に.顆粒球マクロファージコロニー刺激因子とインターロイキン-4（IL-4）を加えた培地で培養しました。 カチオン性リポソームDOTAPを用いて.大腸菌から得たSp17結合タンパク質をDCに送達し.Sp17抗原提示細胞とすることができました。 新鮮な末梢血単核細胞とSp17担持DCを10：1の割合で混合し.IL-2.自身の血清.IL-7とともに37℃でインキュベートした。IL-2は3-4日ごとに.自身のPBMC供給細胞とSp17共蛋白は毎週加え.4サイクル後にTリンパ球を細胞障害性アッセイのために採取した。 Sp17抗原で刺激したTリンパ球の細胞傷害性を.Sp17を発現または非発現のEBVトランスフェクト自己リンパ芽球系細胞株（LCL）と自己卵巣癌細胞を標的細胞として.標準4時間クロム放出アッセイを使用してアッセイした。 細胞傷害性効果のHLA依存性を調べるために.抗ヒト白血球抗原-I（HLA-I）および抗HLA-II抗体を培養液に添加した。 フローサイトメトリー技術により.Tリンパ球の表現型と細胞内リンパカイン含有量を分析した。
その結果.新鮮な卵巣がん10検体中7検体がSp17陽性で.Sp17発現率は70％であった。 腫瘍組織には.正常な精巣組織と同様に.豊富なSp17分子が発現していた。 Sp17特異的Tリンパ球は.DCによるPBMCへのSp17の送達とSp17共タンパク質の感作作用によって増殖し.細胞障害性アッセイにおいてSp17を発現する自身のLCLを殺すエフェクター細胞として有効だった。LCL細胞の溶解はSp17依存的であり.Sp17遺伝子が導入されていない.すなわちSp17を発現しないLCLは溶解せず( P0.00001). また.標的細胞の溶解はHLA-Ⅰによって制限され.抗HLA-Ⅰモノクローナル抗体によって細胞障害作用が阻害されることがわかったが.抗HLA-Ⅱモノクローナル抗体は細胞障害作用に影響を及ぼさないようだった（P0.000001）。細胞障害に関わるTリンパ球はCD8陽性.すなわち細胞障害性Tリンパ球（CTL）と考えられ.患者の免疫系におけるSp17特異的CTLの存在が示唆された。 細胞傷害性アッセイでは.3人の患者すべてで自分の腫瘍細胞を標的細胞として腫瘍細胞が死滅し.この効果は抗HLA-Ⅰ抗体でも阻害されたが.抗HLA-Ⅱ抗体では阻害されなかった。このことから.Sp17陽性腫瘍を持つ患者ではHLA-Ⅰと関連したSp17特異的CTLが存在することが改めて示唆され.Sp17コプロテインが感作し認識できることが証明された。 また.Sp17コプロテインは.Sp17陽性腫瘍細胞表面のSp17と同様の濃度・表現型でSp17を認識するCTLを感作・増殖させることが実証された。 CMAはPerforin経路の標的細胞の溶解を選択的に阻害し.Brefeldin AはFasを介したアポトーシス経路を阻害したため.以下のことが実証された。 Sp17特異的CTLはパーフォリン経路を介した標的細胞溶解を仲介する。 フローサイトメトリーの結果.実験で増殖したTリンパ球の表現型はほとんどがCD8陽性で.細胞毒性アッセイの結果と一致し.エフェクターTリンパ球はCD8陽性.すなわちCTLであることが示された。 Sp17コプロテインでTリンパ球を再刺激すると.2色フローサイトメトリー法により.CTLは主にIFN-γと検出量のIL-4を生成し.ヘルパーTリンパ球1（Th1）と一致することがわかった Th1と一致するサイトカインプロフィール。
この研究により.卵巣がん腫瘍ワクチンの標的分子としてSp17を使用することは可能であると結論付けることができます。