家族特異的抗リンパ腫ワクチン用免疫グロブリン・サイトカイン融合遺伝子の構築…

  目的】家族特異的な抗リンパ腫核酸ワクチンとして.免疫グロブリン重鎖可変領域(IgHV)遺伝子断片とサイトカインGM-CSF(顆粒球コロニー刺激因子)またはIL-2(インターロイキン2)の融合遺伝子発現ベクターを構築し.動物を接種して.このワクチンの抗リンパ腫免疫機能を理解させること。  方法:臍帯血免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから断片長が大きく異なる6つのIgHV3断片遺伝子断片を入手し.塩基配列を決定した後.それらの重鎖可変領域のT細胞エピトープを予測するバイオインフォーマティック・リソース解析に用い.一方.我々の研究室で以前に構築した16のIgHV断片については.解析を行った。 T細胞エピトープの大部分を含むIgHV1とIgHV3遺伝子を選択し.フレームワーク領域(FR)優位のIgHV(FR)遺伝子断片とIgHV(FR)とGM-CSFまたはIL-2遺伝子を連結してできた融合遺伝子を真核生物発現ベクターにクローン化した。 発現ベクターをリポソームによってCOS細胞にトランスフェクトし.GM-CSFまたはIL-2の発現をELISAによって測定した。 一部の発現ベクターを核酸ワクチンとしてマウスに免疫し.同系統のリンパ腫と正常リンパ球に対する免疫応答を間接免疫蛍光法およびサイトカイン分泌アッセイで測定した。  結果:コンピュータスコアリングシステムによる予測では.各IgHV配列にはHLA遺伝子座によって制限された約30のT細胞エピトープが存在し.90%以上のT細胞エピトープはフレームワーク領域に位置し.スコアランキングの上位10%のT細胞エピトープはフレームワーク領域に位置することが示された。 IgHV1(FR)とIgHV3(FR)の真核生物発現ベクターは.CDR3領域からフレーム領域(FR)を優位に削除して構築することに成功した。 IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0におけるGM-CSFの発現量はコントロールの200倍以上.IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0におけるIL-2の発現量は60倍以上であった。 IgHV1ファミリーに属するリンパ腫ナマルワ細胞株に対する抗体は.初回免疫後2週目にIgHV1(FR)-IL-2免疫動物で.4週目にIgHV1(FR)群で検出されました。 血清IFN-γ値は.IgHV(FR)-IL-2群でpcDNA3.0群およびIgHV(FR)群に比べ有意に高値を示した。