混合細菌＋機械的損傷によるラットの慢性骨盤内炎症性疾患に対する骨盤内炎症性顆粒の抗炎症作用の機序を検討する。 方法：ラット慢性骨盤内炎症疾患モデルを混合細菌＋機械的損傷法で再現し.正常群.偽手術群.モデル群.骨盤内炎症ネット群.骨盤内炎症顆粒高・中・低用量群に無作為に分けた。 結果：骨盤内炎症性顆粒は.モデルラットの血清IL-6値を有意に低下させ.血清IL-4値を有意に上昇させた。
結論：モデルラットに対する骨盤内炎症性顆粒の抗炎症作用のメカニズムは.血清プロ炎症性因子レベルを低下させると同時に抗炎症性因子レベルを上昇させ.それによって炎症性因子のバランスを回復し.局所炎症反応と線維形成の抑制を図るものと思われます。
慢性骨盤内炎症性疾患;骨盤内炎症性顆粒;炎症性サイトカイン
慢性骨盤内炎症性疾患は.腹痛.季肋部痛.骨盤内組織の肥厚.癒着.腫瘤形成を特徴とし.婦人科領域でよく見られる頻度の高い疾患である。 再発・持続することが多く.その予防と治療は婦人科領域で解決すべき重要な課題となっています。 今回.骨盤内炎症性顆粒がラットの血清炎症性サイトカインに及ぼす影響を.これまでの実験に基づいて観察し.血液活性化法および腎臓強壮法の抗炎症作用の機序を検討することとした。
1.材料と方法
1.1 実験動物
体重200±20gのSPFグレードの雌Wistarラット65匹を山東中医薬大学実験動物センターから購入した（動物証明書番号：SCXK(LU)20050015）。
1.2 実験用医薬品
骨盤炎症顆粒：山東中医薬大学附属病院製剤室提供.成分は丹参.赤芍.生黄.炒甘草.芥子.角觝.鳳梨.芳香薬草です。 骨盤消炎顆粒：昆明潔達医薬有限公司で製造.認可番号：国家薬物登録番号Z20013124.主成分は茵蔯蒿湯.桂枝茯苓丸.益母草.泉門.犬脊などである。 骨盤炎顆粒.骨盤炎ピュア顆粒の成人用法・用量は.いずれも1日30gで.蒸留水による懸濁液として調製し.1mlあたり325mgの薬物を含有します。
1.3 実験用試薬
インターロイキン-4（IL-4）およびインターロイキン-6（IL-6）ELISAテストキット.米国ADL社製；菌株：大腸菌.黄色ブドウ球菌.溶血性連鎖球菌B型を2：1：1で滅菌食塩水に溶解し30億/mlの混合細菌懸濁液とした.山東省衛生疫病予防所菌株室から提供されたもの。
1.4 試験方法
1.4.1 モデル再現法［3％ペントバルビタールナトリウム（40mg/kg）で腹部麻酔後.無菌状態で下腹部を1cmの正中切開し.開腹して子宮を露出固定.1ml注射器で混合菌懸濁液を0.2ml抽出し.注射器で機械的に内膜組織を傷つけ.両側の子宮にそれぞれ0.1mL注入し.切開部分を縫合した］。 偽手術群では.麻酔後に開腹し.滅菌注射用水を子宮の両脇に0.1mLずつ注入した後.閉腹した。
1.4.2 群分けと薬物投与方法 65匹のラットから無作為に8匹を正常対照群.8匹を偽手術群とし.残りの49匹を型どりに参加させた。 残りのラットは.骨盤内炎症性ペレット高用量群.骨盤内炎症性ペレット中用量群.骨盤内炎症性ペレット小用量群.骨盤内炎症性ペレット群.モデル群にランダムに8匹ずつに分けられた。 成型後.2週間保管し.薬剤投与を開始した。
骨盤内炎症性ペレット製剤を大用量群6.48g/kg/日.中用量群3.24g/kg/日.小用量群1.62g/kg/日.骨盤内炎症性ペレット製剤をガベージで投与.対照群.モデル群.偽手術群はいずれも蒸留水1ml/100g/日を特に処置せずガベージで投与とした。 1日1回.14日間投与されました。
1.4.3 試験項目 薬剤投与後15日目の早朝に各群のラットを絶食させ.抗凝固剤入りチューブに固定し心臓から4～5ml採血した。 上清を遠心分離（3000 r/m in）により10分間分離し.-30℃で保存し.ELISAによる免疫学的解析を行った。
1.4.4 統計方法 統計ソフトSPSS17.0を使用し.測定データはt検定により平均値±標準偏差（±s）で表し.多群間の比較はANOVAにより解析し.P<0.05を有意差.P<0.01を非常に有意差として算出した。
2.実績
2.1 全群のラットにおける血清IL-6濃度検出結果
実験の結果.骨盤内炎症性疾患ラットのIL-6の血清濃度は正常ラットに比べて有意に高かったが（P<0.01）.偽手術ラットと正常対照群の間には有意差はなかった（P>0.05）。 骨盤内炎症性ペレット群と骨盤内炎症性ペレットの全用量群はその濃度を有意に低下させることができた（P<0.01）。中でも骨盤内炎症性ペレットの中用量群.高用量群の効果は最も顕著で.濃度は正常値に近い（P>0.05）となり.骨盤内炎症性ペレットの少量群は骨盤内炎症性ペレットの群より有意に高かった（P <0.01).
Table 1 各群のラットにおける血清インターロイキン-6（IL-6）の発現量（±s）
グループ
n
インターロイキン-6(ng/L)
通常群
8
118.23±10.82||
偽手術群
8
122.23±23.22||
モデル群
8
205.08±24.67※※▲▲
骨盤内炎症性顆粒剤高用量群
8
126.91±11.94||
骨盤内炎症性顆粒剤 中用量群
8
131.99±14.82||
骨盤内炎症性ペレット低用量群
8
177.34±9.98※※||▲▲
骨盤内炎症性ネットグループ
8
130.88±13.29||
注）正常群と比較して.※P<0.05.※P<0.01.モデル群と比較して.｜P<0.05.｜P<0.01.骨盤内炎症性ネット群と比較して.▲P<0.05.▲P<0.01.以下同じ。
2.1 各群のラットの血清IL-4濃度検出結果（表2参照）
実験の結果.骨盤内炎症モデルのラットの血清IL-4値は正常ラットに比べて有意に低く（P<0.01）.偽手術群のラットは正常対照群と有意な差はなかった（P>0.05）。 骨盤内炎症性ペレットのレベルは.すべての投与群と骨盤内炎症性ネット群で有意に上昇したが（P<0.01）.骨盤内炎症性ペレット高投与群のレベルは正常に近く（P>0.05）.骨盤内炎症性ペレット中・低投与群のレベルは骨盤内炎症性ネット群のレベルに近く（P>0.05）.骨盤内炎症性ペレットのレベルは.すべての投与群に共通して上昇した。
Table 2 各群のラットの血清インターロイキン-4（IL-4）濃度（±s）
グループ
n
インターロイキン-4(ng/L)
通常群
8
130.62±21.14||▲▲▲
偽手術群
8
124.70±18.48||▲▲
モデル群
8
55.42±10.99※※▲▲▲
骨盤内炎症性顆粒高用量群
8
130.19±11.43||▲▲
骨盤内炎症性顆粒剤 中用量群
8
骨盤内炎症性顆粒剤 少量投与群
8
骨盤内炎症ペレット群
8
83.71±10.63※※||
3.ディスカッション
慢性骨盤内炎症性疾患の中には.慢性期の発症ではもはや病原性を持たないものもあり.慢性期の病態変化は細菌感染に続発する免疫反応の結果であり[2].関連サイトカイン.炎症メディエーター.フリーラジカル.アポトーシス細胞などの免疫因子の異常変化が関連していると言われています。 炎症性サイトカインは.IL-6.IL-1.IL-8.IL-12.腫瘍壊死因子（TNF）などの炎症性サイトカインとIL-4.IL-10.IL-13などの抗炎症性サイトカインに大別される。 炎症性サイトカインは炎症の発生を促進し.抗炎症性サイトカインは炎症反応を抑制し.組織の修復・再生を促進します。 この2つのバランスが.組織の外傷や炎症の結果を左右することになるのです。
IL-6は.炎症媒介活性を有するサイトカインであり.感染時の好中球の産生・活性化.B細胞の増殖・分化や免疫グロブリンの産生.各種細胞の急性期タンパク質の合成・分泌を誘導してT細胞の増殖・分化を促進するなど.炎症初期における重要な炎症因子として知られています。 IL-6は.慢性炎症期において.リンパ球の増殖・成熟因子として局所の組織免疫異常を引き起こし.さらに組織障害や線維化を媒介する。 IL-4は.Th2細胞が典型的に産生するサイトカインで細胞障害性T細胞を活性化し.TおよびBリンパ球の発達.体液性免疫応答と抗体産生の駆動に重要である。
慢性骨盤内炎症性疾患は再発しやすく.治りにくい疾患ですが.「慢性病は瘀血（おけつ）」「慢性病は腎（じん）」という漢方の理論に基づき.瘀血を活性化し.腎を整えることで骨盤内炎症性顆粒を作製しています。 この薬によって.患者さんの体液や細胞の免疫力を向上させることができることを明らかにしました。 骨盤炎顆粒は.モデルラットにおいて.血清IL-1B.IL-8.MCP-1レベルを有意に低下させ.血清IL-10レベルを有意に上昇させることが証明されています。 線維形成症。
この実験の結果.骨盤内炎症性疾患ラットのIL-6のレベルは正常群より有意に高く.IL-4のレベルは正常群より有意に低かった。これは.慢性骨盤内炎症性疾患の病態過程において.炎症促進因子と抗炎症因子のバランスが崩れ.炎症促進因子が過度に産生され.対抗する抗炎症因子が不足して.組織の損傷と線維形成の原因となる炎症が生じていることを示し.骨盤炎症粒の投与群は異なる程度で炎症促進因子レベルを低減したことを示した。 一方.骨盤内炎症ペレットは.服用するごとに炎症促進因子IL-6が減少し.抗炎症因子IL-4が増加し.炎症/抗炎症の動的バランスが炎症の消失と病的変化の抑制に向かって進化し.炎症の治癒が促進されました。 これも.骨盤内炎症性顆粒が.この病気の治療における血液活性化・腎臓強壮法の作用機序の一部である.アンバランスな炎症性因子のネットワークにバランスを取り戻すことによって抗炎症作用を発揮していることの証拠かもしれませんね。