I. 術前準備
気管支鏡検査（線維柱帯切除術）の術前準備と同様に.線維柱帯切除術後.生検前にBALをルーチンに行う。局所麻酔薬として2％リドカインが使用される。
BAL手術手技
1.洗浄部位の選択。びまん性間質性肺疾患の場合は.右中葉（B1またはB5）または左舌側セグメントを選択し.限局性肺病変の場合は対応する気管支肺セグメントでBALを実施する。
回収液は直ちに二重にした滅菌ガーゼでろ過して粘液を除去し.総量を記録した後.シリコン製のプラスチックボトルまたはシリコンコーティングした滅菌ガラス容器（細胞の付着を減らすため）に入れ.氷を入れた魔法瓶に入れて.直ちに検査室へ送った。粘液は直ちに検査室に送られ.検査された。
気管支肺胞洗浄液（BALF）の実験室検査
I. BALF総細胞数および仕分け数検出
1. 上記回収した洗浄液をプラスチック製遠心管に詰め.1,200r/min.4℃で10分間遠心分離し.上清（原液または10倍濃縮液）を70℃で保存し.可溶成分の検出に使用した。
2. 遠心分離により沈殿した細胞成分を.同条件のHank’s溶液（Ca2+およびMg2+を含まない）で.各回5分間.2回洗浄した。上清を捨てた後にHank’s溶液を3〜5ml加え.細胞懸濁液とした。また.細胞の損失を抑えるために.洗浄液を適用することも可能である。
3. 3. BALF中の細胞の総数をmodified Neubauer counterでカウントし.通常1×109/Lで表示する。細胞数が多すぎる場合は.細胞数を増やす必要がある。細胞数が多すぎる場合は.Hank’s溶液で希釈して5×109/Lに調整し.チューブを砕いた氷の中に浸す。
4. 4. セルソーティング 細胞遠心塗抹装置を用い.100μlの予備細胞懸濁液（細胞濃度5×109/L）を加え.1 200r/min.4℃で10分間遠心し.一定数のBALF細胞をスライド上に直接遠心分離により撒き散らす。スライドは直ちに冷風で乾燥し.無水エタノールで30分間固定した後.通常ライト染色またはHE染色を行う。
5.40倍の光学顕微鏡下で200個の細胞をカウントし.セルソーティングを行う。
BALF中のTリンパ球のサブポピュレーションの検出
1.間接免疫蛍光法により.上記で得られたBALF細胞成分を10％子牛血清RPMI1640培養液3〜5mlで細胞懸濁液とする。
2.細胞懸濁液を平皿に入れ.37℃.5％CO2インキュベーターで2時間培養し.肺胞マクロファージを除去する。
3.細胞懸濁液を除去した後.ハンクス液で洗浄し.1回遠心分離して上清を捨て.20～100μl残す。壁処理後の細胞懸濁液では.肺胞マクロファージが有意に減少し.リンパ球が相対的に増加した。
4, 壁処理した細胞懸濁液を3本の小さな円錐形遠心管に分け.1本あたり20〜30μl.モノクローナル抗体CD3.CD4.CD8をマイクロスパージャーで検体に加え.冷蔵庫で4℃.1〜2時間混和した後.検体を取り出す。
5.検体を取り出し.まずハンク溶液でリンスし.12 000 r/minで20秒間2回遠心し.各ヤギ抗マウス蛍光抗体20～40μlを加え.4 ℃の冷蔵庫で30分間静置する。
6. 検体を取り出し.ハンク溶液で同じ速度.時間で2回遠心分離して洗い.上清を捨て.20μl残して細胞を十分に混合し.スライドとカバースリップに1滴取る。蛍光顕微鏡でリンパ球を200個数え.蛍光標識された細胞の陽性率を計算する。
いくつかの注意点を挙げる。
1. 気管支肺胞洗浄に使用するフィブリノスコープの先端径は5.5～6.0mm程度とし.気道分泌物の混合や洗浄液の流出を防ぎ.BALFを確実に回収するために.セグメントまたはサブセグメントの気管支開口部に適切に挟み込んでおくこと。
2.洗浄過程では咳嗽反射を十分に抑制しなければならず.そうでなければ気管支壁の粘膜損傷を引き起こしやすく.洗浄液の混合を引き起こし.回収量にも影響する。
3.適格なBALF検体であること。回収率40％以上.生存細胞95％以上.赤血球10％未満（外傷・出血要因を除く）.上皮細胞3～5％未満.塗抹細胞の形態が無傷.変形なし.分布が均一であること。
4. 肺胞内膜液の希釈度は.灌流量や回収量.肺胞上皮の透過性など.BALF中の可溶性成分の検出に影響を与える多くの要因によって変化する。BALF 可溶性成分の標準化には.内標準物質や外標準物質が用いられているが.検査結果に差異があり.その臨床的価値には限界があるため.本案では BALF 液性成分の検出方法について規定しないこととする。
5.本規格は.気管支洗浄（BL）及び全肺洗浄法の液量が少ない場合の操作には適さない。
6.健康な非喫煙者におけるBALF細胞診検査の正常基準値。
(1)総細胞数：総細胞数（0.9～0.26）×109/L.うち肺胞マクロファージ0.93±0.03.リンパ球0.07±0.01.好中球・好酸球は0.01以下である。
(2) Tリンパ球サブセット：総T細胞（CD3+）0. 7.Tヘルパー細胞（CD4+）0. 5.Tサプレッサー細胞（CD8+）0. 3.CD4+/CD8+比1. 5から1.8。