アッセイ HIV感染者の体液中のウイルス抗原や抗体を検出する方法は.実施も容易で普遍的に適用しやすく.特に抗体検査が一般的である。
抗体検査 血清中のHIV抗体は.HIV感染の間接的な指標となるものである。
確認試薬 スクリーニング検査で陽性となった血清の確認検査として最もよく用いられるのはウェスタンブロット(WB)ですが.これはウィンドウ期間が比較的長く.感度がやや悪く.コストが高いため.確認検査としてしか適していません。FDAが承認したもう一つのスクリーニング検査は免疫蛍光法(IFA)で.WBより安価で.実施も比較的簡単で.1~1.5時間で全工程が完了する。この方法の主な欠点は.高価な蛍光検出器と.結果を観察・判断する熟練した専門家が必要なこと.そして結果の長期保存ができないことである。現在.FDAはWBが判定できない献血者に最終結果を公表する際.IFAが陰性か陽性かを推奨しているが.血液適格性の基準にはしていない。
スクリーニング検査 スクリーニング検査は主に献血者のスクリーニングに用いられるため.操作が簡単.低コスト.感度・特異性が要求される。2012年.世界の主なスクリーニング方法はまだELISA法であり.いくつかの粒子凝集試薬と迅速ELISA試薬があります。
粒子凝集試験は.別のシンプルで便利な操作.低コストの検出方法であり.メソッドの結果は.特に発展途上国やスクリーニング血液ドナーの多数に適した肉眼.高感度で決定することができ.欠点は.新鮮なサンプルを使用する必要があります.特異性が低いです。
80年代後半に開発されたスポットブロットアッセイ(ドットブロットアッセイ)は.迅速なELISA(ラピッドELISA)法であり.操作が極めて簡単で.工程は短く.ほとんどの工程が5~10分.あるいは3分以内に完了できるが.ELISAや粒子凝集試薬に比べてはるかに高価な方法である。
ヒト免疫不全ウイルス抗体口腔粘膜滲出液検査キット(コロイド金法)は.側面免疫クロマトグラフィー(金免疫測定法)のカテゴリーに属し.口腔粘膜滲出液検体中のHIV-1とHIV-2抗体を手動操作で.裸眼で読み取り.20分で定性結果を得られる免疫クロマトグラフィー技術による迅速診断試薬である。任意のカウンセリング検査.消極的な採血.針めまい患者の一次スクリーニングなどに利用できる。この方法は一次スクリーニング検査に適しており.この試薬で陽性と判定された人は.確認のためにさらにスクリーニング検査を受ける必要があります。
HIV陰性とは.人体からHIV抗体が検出されないことをいい.陰性記号は(-)で表示されます。) 検査を行った時期によって異なります。
【HIV陽性】は.人体からHIV抗体が検出されたことを意味し.陽性の記号は(+)で表示されます。
検査結果が不確定になる要因 感染がまだウインドウ期にある:HIVが体内に侵入してから検査までの期間が短いため.血清中にまだ典型的な抗体反応が形成されていない エイズが末期まで進行すると抗体値が下がる 他の非ウイルスタンパク質抗体の交差反応:自己免疫疾患.特定の悪性疾患.妊娠.輸血または臓器移植など。
抗原検出 病原体検出とは.主にウイルスの分離培養.電子顕微鏡による形態観察.ウイルス抗原検出.遺伝子検査によって.宿主検体からウイルスやウイルス遺伝子を直接検出することを指します。前2者の方法は困難であり.特殊な設備と専門の技術者を必要とするためです。そのため.臨床診断に用いることができるのは.抗原検出とRT-PCR(逆転写PCR)のみである。HIV-1P24抗原検出は.HIV-1抗体の不確実性やウィンドウピリオドの診断の補助.HIV-1抗体陽性の母親から生まれた乳児の早期鑑別診断の補助.第4世代のHIV-1抗原/抗体ELISA試薬検査陽性として使用できるが P24抗原検査は一般にELISA二重抗体サンドイッチ試薬で行い.SDAによって承認・登録され.陽性結果は試薬説明書に沿って中和試験で確認されなければならない。HIV-1 P24抗原検査陰性は.この検査で反応がないことを意味するだけで.HIV感染を除外することはできないので.一般に臨床の日常診断項目としては使用されない。
HIV核酸検査は.HIV感染の診断補助.疾患の経過観察.治療計画の指導と効果の判定.疾患の進行予測に使用されることがある。一般的に用いられるHIVウイルス量検査法には.逆転写PCR法(RT-PCR).核酸配列増幅法(NASBA).分岐DNAハイブリダイゼーション法(bDNA).およびリアルタイム蛍光定量PCR技術が含まれる。各HIV RNA定量システムには.最小検出限界.すなわち.測定可能な最小コピー数または国際単位があることは注目に値する。HIV核酸検査陽性は.HIV感染症の診断の補助的な指標として用いることができ.HIV感染症の診断に単独で用いることはできない。定量的HIV核酸検査結果を報告する場合.測定結果は機器の読み取り値に従って.使用した実験方法.試料の種類.試料量を示し.測定結果が最小検出限界より低い場合は.最小検出限界レベルを示す必要がある。
定量的HIV核酸検査は.HIV感染の診断やHIV遺伝子サブタイプおよび変異体の分析などの基礎研究においても補助的に使用することができます。通常.分子生物学研究所で一般的な増幅試薬を使用したPCRまたはRT-PCR技術が使用される。プライマーは文献に由来するものでも.患者が設計したものでもよく.すべての株または一般的な株をカバーするようにする必要があり.プライマーを組み合わせて使用することも可能である。定性試験の結果を報告する際には.反応条件と使用したプライマー配列を明記する。また.核酸検出法の高感度を生かし.感染の疑いが強く抗体陰性の集団から採取した検体をプールした核酸増幅アッセイや核酸検査方法を用いることで.ウィンドウフェーズ感染をタイムリーに検出することが可能である。この方法は.単一サンプルの核酸検査よりも費用対効果が高い。
培養法 一般的な方法は共培養で.正常ヒト末梢血から単核細胞を分離してPHAで刺激培養し.患者の単核細胞に加えて診断やAIDSの研究を行う方法である。
患者自身の末梢または骨髄リンパ球をPHAで48〜72時間刺激し.1〜2週間体外培養(培地にIL2を添加)すると.ウイルス増殖が細胞外に放出され.細胞が融合して多核巨大細胞となり.やがて分解して死滅することがあります。また.HT-H9細胞やMolt-4細胞などの継代リンパ球株を用いて細胞を分離・継代することもできる。
動物のHIV感染範囲は狭く.チンパンジーとギボシのみで.一般にはチンパンジーが実験に用いられる。チンパンジーにHIV細胞や無細胞HIV濾液を感染させたり.HIV感染チンパンジーの血液を正常チンパンジーに輸血することは成功し.8カ月間安定して血液やリンパ液からHIVが分離され.3〜5週間後にHIV特異的抗体が検出され一定のレベルを維持し続けました。しかし.感染後.チンパンジー.テナガザルともに病気は発生しなかった。