ほとんどのいぼは肉眼で診断できますが.扁平いぼのようにしばらくは臨床的に診断できず.梅毒の血清検査が必要なものなど.検査薬などに頼って診断するものもあります。 以下は.一般的に使用されているテストの一部です。
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酢酸検査の主な目的は.特に子宮頸部不顕性HPV感染のある女性において.不顕性HPV感染を検出することです。 感度がよく.簡便であるため.一般的な臨床研究や疫学研究に適しています。
不顕性HPV感染は臨床的に重要な病変よりもはるかに多く.特定の方法によってのみ検出できることはよく知られていることです。 不顕性HPV感染は.最初は子宮頸部に.後に女性の外陰部.男性の陰茎および肛門周囲に認められます。 不顕性HPV感染症は.単独で.あるいは肉眼で見えるイボの形で発見されることがあります。 近年.HPV感染と新生物の関連が多くの研究で確認されていることから.HPVの不顕性感染が注目されています。 HPV感染の検出には.免疫学的方法.デオキシリボ核酸分子ハイブリダイゼーション.多型酵素連鎖反応など.多くの検査方法がある。 血清学的検査はまだなく.HPVを培養することはできません。 上記の実験法はある程度の感度や特異性を持っているが.より複雑な実験装置や技術を必要とするため.一般的な臨床や疫学的な現場での応用は難しい。 近年.酢酸がHPV感染部位を白くする性質を利用して.HPVの不顕性感染を検出することを提案する学者もおり.この方法と増幅技術を組み合わせれば.より簡便で適用範囲が広く.正確な方法となることが示唆されています。 この方法は.当初.女性の子宮頸部におけるHPV感染の疑わしい部位を特定するために使用されていましたが.最近では.性器いぼの損傷や上皮内増殖のある女性の性的パートナーの男性における不顕性障害の検出に関心が移ってきています。 最近の調査では.尖圭コンジローマの組織学的症状を有する女性の性的パートナー男性51人のうち72％が.正常な陰茎表面皮膚に5％酢酸溶液を塗布した後.コルポスコピーにより無症状のHPV感染症であると確認されました。
方法と根拠
3％～5％の酢酸溶液に浸した綿棒を傷んだと思われる皮膚に当てると.通常1分後に白化（白酢酸-アセトンホワイトともいう）の結果を観察することができる。 しかし.女性の外陰部では.酢酸の白色化は3〜5分後にしか観察できない。 男性の場合.診察時には3～5％の酢酸を染み込ませたガーゼで陰茎と陰嚢を3～5分間覆い.外皮を10～16倍に拡大して観察し.隠れたイボや酢酸で白くなっている部分がないかどうかを確認する必要があります。 肛門周囲病変を確実に白くするためには.通常15分程度の長時間の照射が必要な場合があります。 白色酢酸検査は.拡大技術.特にコルポスコープ観察との同時使用により.コルポスコープの拡大で白色酢酸部分がより見えるように改良されましたが.ほとんどの場合.簡単な拡大鏡の使用で十分なのです。
目立たないイボを肉眼で見えるようにする「白色酢酸テスト」の作用機序は解明されていない。 一説には.美白はタンパク質の凝固の結果であり.このタンパク質はHPVに感染した上皮に特徴的な異常細胞や細胞過剰を反映していると言われています。 また.HPVに感染した上皮は.感染していない正常な上皮とは異なるケラチンを持っており.前者のみが酢酸で白くなることができるとする説もある。
コルポスコピーに関する発表
酢酸の使用後.子宮頸部の不顕性HPV感染のコルポスコピーの特徴は.光沢のある雪白色の病変で.不規則なギザギザ.角状または羽状の縁があります。 転移巣を越えたところにびまん性の衛星病変があり.一方.毛細血管像が見られるが.通常は同じ口径の血管が水平面上にしばしば篩にかけたように緩く乱雑に配列され.拡張した毛細血管傍系も表面に垂直に伸び.同じ管径で病変全体に広がっている場合がある。 酢酸による小血管の収縮で血管像が十分に鮮明でない場合は.虫眼鏡に緑色のフィルターを付けて鮮明にすることができる。
子宮頸部コルポスコピーと同様に.男性性器HPV感染症の酢酸白帯は.コルポスコピーでは雪のように白く明るい輝きを放ちます。 男性における不顕性HPV感染の22％が陰嚢で発生していることは注目に値する。この解剖学的領域はHPVの避難所となりうるため.ほとんど注目されていないが.重要な感染部位であると考えられる。 Wikstromは男性生殖器における酢酸白色の表示を.拡大率によって3タイプに分類している。
1. 典型的なもの：容易に区別でき.わずかに隆起した辺縁の損傷が見えるとともに.上皮の陥没に関連または無関係な点状の中心毛細血管が見える。
2. 区別しやすく.わずかに隆起した縁を持つが.明瞭な点状毛細血管を欠く.はっきりと目に見える損傷。
3. 非定型：縁が高く凹凸があり.点状毛細血管を欠く損傷。
臨床応用
Wikstromの調査では.酢酸白色試験で典型的で明らかなHPV感染の62％が病理組織学的所見と一致した。 一方.非典型的な表現で一貫性があるのは11％のみでした。 病理組織学的所見に基づく場合.酢酸白濁検査の感度は85％.特異度は12％である。 核酸ブロッティングやin situハイブリダイゼーション技術に基づくと.感度は85％.特異度は11％である。 酢酸白濁法の感度と複雑な装置を必要としない簡便さから.一般臨床研究および疫学研究に適している。
白色酢酸試験は.臨床の現場では主に不顕性HPV感染の検出に用いられています。 女性の子宮頸部HPV感染の多くは不顕性感染であるため.酢酸を使用することで初めて目に見えるようになるのです。 女性では外陰部コンジローマがよく見られますが.不顕性感染を併発していることが多いので.外陰部の酢酸白濁検査で不顕性HPV感染を検出することで.コンジローマの再発源を特定することができます。 第二に.これまで原因不明であった性交時の前庭のかゆみ.灼熱感.不快感の原因として.不顕性HPV感染を認識することができ.これは患者にとって非常に苦痛なことです。 後者の症状は通常長期にわたるため.カンジダ感染症と誤診されることもあり.長期にわたる効果的でない治療によって悪化するばかりである。
男性性器に不顕性HPVが感染すると.肉眼で確認しにくい小さな病変.特に丘疹や斑状病変が生じますが.これらは非常に細かい検査でも発見しにくく.酢酸を使用すると境界のはっきりした「酢酸ホワイトニング領域」として現れることがあります。 ハイリスク男性における不顕性HPV感染のスクリーニングは.女性の子宮頸がん予防に重要である。 臨床的に重要でないHPV感染の男性が.女性にがんを引き起こす可能性のあるHPVの感染源となりうることが示唆されている。 組織学的に子宮頸部上皮内新形成（CIN grade III）と診断された女性の性的パートナー男性75名を対象としたロンドンの調査において.49名（65％）が組織学的に陰茎HPV感染が確認され.16％が臨床的に目に見える損傷を示し.49％が酢酸白濁試験とコルポスコピーにより不顕性HPV感染が確認されました。
HPVの不顕性感染はよくあることで.酢酸白濁検査で判明した症例の一部は.原則的に治療すべきですが.実際には難しいです。 現在.ほとんどの臨床医は肉眼で見えるイボの除去のみを試み.不顕性障害の特定には注意を払っていない。 酢酸ホワイト検査は.頻繁に再発を繰り返す患者や.臨床的外観が正常な患者の性別スクリーニングの場合にのみ実施されている。
その第一は.「ペルオキシダーゼ」という用語の使用である。
検査は通常.ペルオキシダーゼ・アンチペルオキシダーゼ法（＝PAP法）で行われ.イボ内のウイルスタンパク質を示して.イボのダメージにウイルス抗原が存在することを証明します。
をご覧ください。
少量の組織を採取し.ヒト乳頭腫ウイルスに特異的な抗体で染色します。 病変部にウイルス抗原が存在する場合.抗原抗体複合体が存在する。 ペルオキシダーゼ・アンチペルオキシダーゼ（PAP）法では.核が赤く染色されることがある。 この方法は特異的で比較的迅速な診断が可能であり.診断に有用である。
IV.病理学的検査
主な特徴は.不全角化.有棘層の高度の肥大.乳頭状過形成.表皮突起の肥厚と延長で.偽上皮腫様過形成に類似する場合があります。 棘細胞や基底細胞は核分裂がかなり進んでおり.癌腫に類似している。 しかし.細胞は規則正しく並んでおり.増殖した上皮と真皮の境界は明瞭である。 顆粒層と有棘層の上部に特徴的な液胞が形成されることが特徴である。 この空胞化した細胞は通常より大きく.細胞質は淡く着色し.中心核は大きく丸く.深く好塩基性である。 表皮が極端に下向きに成長するBushke-loewenstein巨大コンジロームは.下層組織を置き換えるため.扁平上皮細胞と混同しやすく.複数の生検が必要である。 進行が遅い傾向がある場合は.疣贅癌と呼ばれる低悪性度プロセスです。
V. 遺伝子診断
これまでHPVは.従来のウイルス培養や血清学的手法では検出が困難であり.核酸ハイブリダイゼーションが主な診断手法となっています。 近年開発されたPCR法は.特異性.感度.簡便性.迅速性などの利点を持ち.HPV検出の新たな道を切り開くものである。
(i) 検体の採取と処理
1.検体採取と前処置：スクレーパーや生理食塩水を染み込ませた綿棒で膣や子宮外頚部から分泌物や細胞を採取する。 細胞診をしながら.検体を0.05％チメロサールを含むPBS 5mlに入れ.遠心分離（3000g.10分）によりPBSで2回洗浄し.沈殿した細胞をPBS 1mlに再懸濁し.DNA抽出用に細胞懸濁液を0.5ml採取する。
2.検体からの核酸抽出：細胞懸濁液1容量に10倍量の細胞溶解液（10 mmol/L Tris-HCl, pH 7.4, 10 mmol/L EDTA, 150 mmol/L NaCl, 0.4% SDS, 1.0 mg/ml proteinase K）を加えて37℃で一晩処理し.等量のフェノール／クロロホルム（1：1）.クロロホルム／イソプロパノール（0：1）を加えて37℃で一晩処理。 (24:1)を各2回添加し.1/10容量の3 mol/L NaAc (pH 5.2) と2.5倍容量の無水エタノールを加えて-20℃で2時間または一晩.DNAを沈殿させ.1容量のエタノールで一度洗浄し.60 μlのTE溶液（10 mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 1.0 mmol/L Tri-HCl）で溶かし.1.0 μlのTE溶液（1.0 mol/L Tri-HCl）で溶解した。 mmol/L EDTA）を添加し.37℃で30分間インキュベートした。
(II) PCR増幅
1.プライマーの設計と合成：HPVゲノムは初期領域（E）と後期領域（L）に分けられ.それぞれが一連のオープンリーディングフレーム（ORF）を含んでいます。 Manosらは.表1に示すHPVのL1領域の保存配列から.HPV6.11.16.18.33型と相補的な配列を持ち.他のHPV型も増幅できる合成プライマーMY11とMY09を設計しました。
2. PCR反応試薬：Taq DNA polymerase (2 U/ml).10 mmol/L dNTP reservoir (dATP, dCTP, dGTP, dTTP 各10 mmol/L), 10× PCR buffer (500 mmol KCl, 40 mmol/L MgCl2, 100 mmol/L Tris-HCl, pH 8.5）.100 μmol/L MY11 および MY09 リザーバー.および滅菌ガラススチルにて調製した蒸留水。
3.PCR増幅方法と手順：滅菌した0.5mlシリコン化プラスチック遠心管に入れた100μlのPCR反応溶液を増幅反応に使用した。
(1) 実験前にあらかじめ混合した反応試薬を調製し.分注した。 プレミックス試薬には.検体DNAを除くすべてのPCR試薬が含まれています。
(2) 検体10μlとプレミックス試薬90μlを順番に各チューブに入れる。
(3) パラフィンオイル 80～100μl を加え.卓上遠心機で数秒間高速遠心し.各反応試薬をオイル層下に回収する。 現在.PCR試薬は25μlの容量で市販されており.検体DNAのみを添加する。
(4) 反応チューブを PCR 増幅器にセットし.95℃ 30 秒.55℃ 40 秒.72℃ 50 秒を 35 サイクルとし.最後に 72℃ 5 分間の伸長を行う。
4.各検査に陽性対照と陰性対照を設定すること。 HPVを含む組換えプラスミド（1反応あたり100pg）またはHPVを含む細胞株（例：Caski.HeLa）DNAをポジティブコントロールとし.HPVを含まないヒト細胞株DNAをネガティブコントロールとして使用することができます。
(iii) 増幅産物の検出と解析
1.ゲル電気泳動：増幅反応後.反応管を取り出し.室温まで冷却し.増幅産物10μlを取り.5％〜7％ポリアクリルアミドゲルまたは1.5％アガロースで電気泳動し.臭化エチジウムで染色.紫外線分析器で分析すると.約450bpの分子量のDNAバンドは明白に現れる。
2.核酸ハイブリダイゼーション：ゲル電気泳動で明確なDNAが得られない場合.またはDNAバンドの特異性を決定する必要がある場合.標識した共通混合プローブおよび/またはタイプ特異的プローブを使用して.サザンブロットハイブリダイゼーションおよびスペックルハイブリダイゼーション検証することが可能です。
32P ATP標識オリゴヌクレオチドプローブは.標準的な方法に従って作成し.約107cpm/pmolの比活性を持つ必要があります。 ハイブリダイゼーション溶液は.2 x 106-5 x 106 cpm probe/mlを含むべきである。 ハイブリダイゼーションは.55℃で2-3時間.ゆっくりと振盪しながら行い.その後.30-55℃の洗浄液（2 x SSC, 0.1% SDS）でハイブリダイゼーション膜を急速に洗浄して余分なプローブを除去する。 MY12.MY13.MY16のプローブでは.56-57℃で10分間洗浄し.溶液を変えて1回再洗浄した。MY14とWD74のプローブでは.58-59℃で10分間洗浄し.溶液を変えて1回再洗浄した。
PCRによるHPVの検出は.核酸ハイブリダイゼーション法よりも優れています。 その感度は高く，GP-PCR法ではゲル電気泳動による直接分析で検体中のHPV DNAを200コピー検出できるが，核酸ハイブリダイゼーションでPCR産物を検出すれば感度が上がり，10コピー検出できるようになる。
PCR法の感度が高いことを考えると.性器から剥離した細胞を使用すれば.生検や組織の粉砕の必要性がなく.検査の必要条件を十分に満たすことができるのです。 一般的には.PCR増幅産物をゲル電気泳動し.得られたDNAを観察することで.直接診断することができる。 したがって.HPV検出のためのPCR法は.短時間で簡便かつ迅速に行うことができます。