強直法は腫瘍に対する一般的な治療法である。 臨床では.この治療法で腫瘍を治療することに利点があるか欠点があるかについて議論がある。 ほとんどの学者は.強壮剤は腫瘍の増殖を抑制し.患者の生存期間を延長し.QOLを改善することができると考えている [1] ；一方.一部の臨床医は.強壮剤は腫瘍の増殖を促進するため.臨床ではあまり使用すべきではないと考えている。 滋養強壮剤の腫瘍に対する効果を調べるため.滋養強壮効果の代表的な処方である四君子湯を選び.ホルモンマウスにおける腫瘍抑制率および腫瘍細胞のアポトーシス誘導に対する効果を観察した。 1.材料と方法 1.1実験動物 昆明種のマウス60匹.体重20g±2g.雄雌半々を第一軍医科大学実験動物センターから購入した。 マウスは別々のケージで飼育され.餌と水は自由に与えられ.マウス室は換気されていた。 1.2 細胞株 細胞株はマウスSRS-82腹水腫瘍株を用い.皮下接種により肉腫を発生させた。 細胞株は本学薬学研究所から提供され.日常的に蘇生培養されている。 1.3 薬物の調製 本実験で使用した薬物は南方病院の薬局から購入し.5-FU注射剤は江蘇南通薬業総工場（蘇維薬業許可第241201号）で製造した。 四君子湯の組成：人参9g.Atractylodes macrocephala 9g.茯苓9g.焼甘草6g.調製：常法水煎2回.得られた煎液を70℃恒温水槽で蒸発濃縮し.最終的に四君子湯薬液濃度（原薬含有）0.33g/ml.4℃冷蔵庫保存。 5-FU注射液は滅菌生理食塩水で3mg/mlに希釈し.4℃冷蔵庫で保存した。 1.4 ホルモンモデルマウスの樹立 SRS-82細胞の体外蘇生培養は.細胞の指数関数増殖期に細胞を回収し.1000r/minで遠心分離し.PBSで2回洗浄し.遠心分離して上清を除去し.滅菌生理食塩水で希釈し.2~3×106/mlに調整した。10匹の健康な昆明マウスを無作為に選択し.各マウスに上記の細胞懸濁液を0.4mlずつ腹腔内注射し.接種後の観察に注意した 約1週間後.接種したマウスの腹部は明らかに膨張し.突出していたので.乳白色の腹水を抽出し.滅菌試験管中で滅菌生理食塩水で1:2に希釈し.最終的に約15mlの腹水希釈液を得た。 上記の腹水希釈液を用い.36匹の昆明マウスに0.2mlずつ右後肢皮下に接種した。 1.5 実験群分けと薬物投与 36匹のモデル化成功マウスを無作為に12匹ずつ3群に分け.群内に番号をつけた。3群はブランク対照群.四君子湯群.5-FU群である。 すべての治療はモデル化後2日目から開始し.四君子湯群には調製した四君子湯煎液を0.5mlずつ1日1回経口投与し.ブランクコントロール群には同量の生理食塩水を毎日経口投与し.5-FU群には希釈した5-FU注射液を0.2mlずつ1日おきに腹腔内注射した。 上記の治療を15日間継続した後.マウスを殺し.腫瘍を摘出した。 1.6 腫瘍の秤量および腫瘍抑制率の算出 腫瘍ブロックを剥がし.電子天秤で秤量し.腫瘍抑制率を常法に従って算出した。 1.7 透過電子顕微鏡による腫瘍細胞の形態および構造の観察 電子顕微鏡観察のために.各群から無作為に2匹のマウスを採取した。 腫瘍体を剥離後.0.5mm3 の腫瘍組織を切り出し.グルタルアルデヒドで迅速に固定した。 脱水.浸潤.包埋.切片化.染色などの工程を経て.よくできた電子顕微鏡切片を透過型電子顕微鏡で観察した。 1.8 アガロースゲル電気泳動 試薬調製後.DNAを抽出し電気泳動した。1%アガロース電気泳動.電圧60V.電気泳動時間1.5時間。 1.9 統計処理 データはすべてSPSS10.0で処理し.ランダムデザインによる分散分析（ANOVA）を用いた。 2.結果 2.1 腫瘍重量および腫瘍抑制率 各群の腫瘍重量および腫瘍抑制率を表1に示す。 表からわかるように.各投与群の腫瘍重量はブランク対照群と比較して有意に減少し.中でも5-FU投与群の腫瘍抑制効果が最も明らかで.腫瘍重量が最も軽かった（P<0.01）；四君子湯にも明らかな腫瘍抑制効果があった（P<0.05）。 表1 各群の平均腫瘍重量と腫瘍抑制率 実験群 腫瘍重量(g) (х±s) 腫瘍抑制率(%) 空白対照群 4.78±1.53 四君子湯群 4.03±1.23* 15.69 5-FU群 3.12±1.08** 34.1 * P<0.05 vs. 空白群, ** P<0.01 vs. 空白群 2.2 透過電子顕微鏡観察 四君子湯群と5-FU群の腫瘍重量が最も明らかであった（P<0.01）。 四君子湯群と5-FU群の切片のほとんどは壊死細胞の変化を示した：クロマチンの淡い染色.小器官の膨潤.液胞様変化。 両群とも.アポトーシスに特徴的な変化を示す細胞は多くなかった。 2.3アガロースゲル電気泳動 DNAの梯子状バンドはアポトーシスを起こした細胞の特徴的な変化であり.四君子湯投与群.5-FU投与群ともにDNA電気泳動の電気泳動バンドには明らかな梯子状バンドは見られなかった。 3.考察 実験の結果.四君子湯群の腫瘍重量はブランク群に比べて有意に減少したことから.この処方は腫瘍の大きさを抑制する効果があり.腫瘍治療の臨床応用に有益であることが示された。 アポトーシス細胞の形態は.初期段階ではコンパクトな核と圧縮された細胞質であり.その後.核は断片化しアポトーシス小胞に進化したが.他のオルガネラは無傷のままであった。 最も顕著な生化学的特徴は.ヌクレオソーム間のDNA二重結合が切断され.DNAアガロースゲル電気泳動で「はしご」として現れる180-200bpの断片が形成されることである[2]。 我々の実験では.電子顕微鏡下での観察とアガロースゲル電気泳動での検出を通して.四君子湯グループは明らかなアポトーシスに特徴的なマーカーを示さず.アガロース電気泳動でも典型的なDNAの「はしご」を示さなかったので.典型的なアポトーシス変化は見られなかった。 この研究により.四君子湯はホルモンマウスにおいて明らかな腫瘍抑制率を示し.そのメカニズムは腫瘍細胞のアポトーシス誘導とは無関係であることが示された。 四君子湯は主に強壮作用があり.直接悪を攻撃する作用はない可能性がある。 in-vivo実験では.四君子湯群に顕著な腫瘍抑制作用が認められたが.これは他の経路を総合的に介して作用している可能性がある。 文献によると.滋養強壮剤は生体内実験において.ホルモン動物の免疫機能と生存時間に良い影響を与えることが報告されている[3]。 四君子湯はホルモンマウスのNK細胞の活性を有意に高めることができ.四君子湯クラスの強壮剤の抗腫瘍メカニズムは.主に身体の免疫機能を改善し.体内のNK細胞やLAK細胞の活性を高め.間接的な殺傷効果を発揮することであると考えられ[3].正を支えて邪を払うという目的を達成することができる。 実験結果から.四君子湯は滋養強壮に属し.ホルモンマウスにおいて腫瘍の成長を著しく抑制することが示唆され.この種の漢方薬が生体内で明らかな腫瘍抑制効果を有することが証明された。 四君子湯は生体内で腫瘍細胞のアポトーシスを誘導せず.腫瘍に対する効果は他の作用によって達成される可能性がある。