米国では.2002年に203,500人以上が新たに乳がんと診断され.39,600人の女性が乳がんで死亡しています。 米国の女性は.一生のうちに乳がんになる確率が11％と言われています。 現在.米国では100万人以上の女性がステージII.III.IVの乳がんを患っていると言われています。 現在の医学では.乳がんを予防したり完全に治すことはできませんが.医学的診断と治療の進歩により.より多くの患者さんが効果的に病気と付き合うことができるようになりました。 また.乳がんの早期診断（自己検診.マンモグラフィ.臨床検査など）により.患者さんの死亡率を大きく下げることができます。 腫瘍マーカーは画像診断の代用にはなりませんが.患者の臨床管理に有用な情報を提供することができます。 腫瘍マーカーは.治療法の選択.病勢進行や再発の予測.治療効果のモニタリングなどに臨床的に利用されています。以下の腫瘍マーカーが使用中または使用が推奨されている： エストロゲン・プロゲステロン受容体 CA15-3 BR27.29 (CA27.29) CEA HER-2/neu (c-erb B2)
エストロゲンとプロゲステロンの受容体
エストロゲン受容体とプロゲステロン受容体は.乳がんの主な組織腫瘍マーカーであり.p53,c-erb B2(HER-2/neu)などのステロイド受容体も含まれます。 ステロイド受容体は.現在.組み入れ基準の仕様に含まれる唯一の組織マーカーである(14-17)。 NACBやEGTMがガイドラインを作成する際に他のマーカーを考慮するには遅すぎましたが.現在.HER-2/neu検査の結果は.転移性乳がん患者に対してモノクローナル抗体ハーセプチン（トラスツズマブ）による治療を行うべきかどうかを決定するために使用されています。
エストロゲンとプロゲステロンの受容体の臨床利用
乳がんの一般的な特徴である腫瘍の大きさ.病理型.腋窩リンパ節の状態に加え.タンパク質バイオマーカーは腫瘍の成長速度.侵襲性.悪性化の可能性の違いを評価する上で有用である。 エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体は.ホルモン剤による治療に対する反応の予測因子として用いられてきた［例えば.タモキシフェン.トレミフェン.ドロキシフェン（「抗エストロゲン」）.メドロキシプロゲステロン酢酸塩およびメゲストロール酢酸塩など］。 反応の予測因子 また.エストロゲン受容体やプロゲステロン受容体のレベルは.ホルモン療法の効果や副作用を評価するための予測因子として使用されています。 また.性ホルモン受容体は.乳がんなどの診断評価における予後因子としても利用されています。
一般に.エストロゲン受容体陽性腫瘍の患者さんは少なくとも短期的には予後が良好ですが.エストロゲン受容体陰性腫瘍の患者さんは通常.悪性腫瘍を有しています。 腫瘍エストロゲン受容体陰性乳がん患者の約30％.腫瘍エストロゲン受容体陽性乳がん患者の75％以上が転移を起こし.10年以内に死亡しています。 エストロゲン受容体とプロゲステロン受容体は.他の因子とともに.再発リスクの高い（予後不良）乳がん患者と再発リスクの低い（予後良好）乳がん患者の腫瘍型を鑑別するための予後指標として用いられてきた。 米国臨床腫瘍学会（ASCO）の臨床実践ガイドラインでは.閉経前後の乳がん患者において.腫瘍の転移の有無を判断し.臨床管理の指針とするために.エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体のレベルを用いるべきであるという見解で一致しています。
基準値の範囲
エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体は.乳房腫瘍のない女性ではほとんど検査されないため.基準値の範囲は不明確である。 リガンド結合法および酵素免疫測定法の結果から.性ホルモン受容体は腫瘍のない乳房組織では低値（<15fmol/mg protein）または検出されないことが.免疫組織化学を用いた多くの研究により確認されています。 通常.10fmol/mg抽出タンパク質（リガンド結合法）または15fmol/mgタンパク質（酵素免疫測定法）をカットオフ値として使用する。 病理学的原因不明の転移を有する腫瘍にエストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体が存在する場合.原発性ホルモン応答性乳癌または他の性ホルモン応答性腫瘍が示唆されます。 生検組織におけるエストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体の分布は.患者の年齢および閉経状態に影響されます。 一般に.乳がんの閉経前女性は閉経後女性より受容体レベルが低い。 乳がん患者さんのホルモン治療法は.患者さんのホルモン反応によって決定されますが.このホルモン反応は生検した腫瘍組織中のエストロゲン受容体とプロゲステロン受容体のレベルに関連しているため.患者さんの受容体レベルを検査することが必要なのです。
エストロゲンベータ受容体をはじめとする性ホルモン受容体のバリエーション
その結果.制御タンパク質には多型があることが分かってきました。 例えば.新たに同定されたエストロゲンβ受容体（ER-β）と.これまで広く研究されてきたエストロゲンα受容体（ER-α）は.DNAやリガンド結合領域にある程度の相同性を示すが（それぞれ96%.58%）.2つのヘテロダイマーはリガンド結合比や生物活性が異なっている。 PR）の共発現は.低生体侵襲性乳がん腫瘍の多くの指標を伴っており.ER-β陽性腫瘍が抗エストロゲン療法に反応する傾向があることを示唆しているが.さらに独立したER-β予測値の確立が必要である。 過去10年間に同定された約20種の性ホルモン受容体バリアントは.切断.エクソン欠失.点変異による欠陥を示し.これらの自然発生アイソフォームやバリアントの臨床的意義を調べるためには.新しい試薬や基準試料の研究がさらに必要である。
分析前の注意点と試料の保存について
どのような分析手法を選択するにしても.乳房組織からの生検を正しく選択し.取り扱うことは.再現性のある検査結果を得るために不可欠である。 まず.手術で切除した後.組織を-20℃で最短時間凍結し.凍結状態で検査室に搬送する必要があります。 凍結切片作製に使用した最適切片温度（OCT）複合体は組織抽出前に完全に除去すること.色素（市販のデビッドソン色素カートリッジなど）を使用した場合は色素を組織から除去すること.出血組織や正常部が大量に付着した生検は避けることなどが必要である。組織抽出物中の性ホルモン受容体は室温では不安定であり.4℃では2〜4時間で不活性化される。 組織抽出液は.抽出後すぐに-70℃で凍結してください。 凍結組織抽出液中の受容体の安定性は.腫瘍の種類.組織に含まれる血液や正常組織.その他多くの要因に依存します。 48時間以内に抽出液を使用しない場合は.残った組織で再抽出を行う必要があります。
分析における考慮点
既存の放射性物質結合測定法および酵素免疫測定法（標準化試薬と安定した標準試料を使用）の精度（CV％4-15％）は.臨床診断に必要な精度より高い。 臨床診断に必要な全不確率は.エストロゲンおよびプロゲステロンが抽出タンパクの30〜50 fmol/mgのとき10〜20％.エストロゲンおよびプロゲステロンが抽出タンパクの100 fmol/mgを超えるとき30〜40％である。
解析後の結果報告に関する留意点
共同臨床試験のデータから.ヒト乳癌生検におけるエストロゲンおよびプロゲステロン受容体のレベルは.抽出タンパク質の10-15 fmol/mg未満では臨床的に意味がないことが示唆された。 -910 -9M から 1-910 -10M は高親和性プロゲステロン受容体を示す。 また.エストロゲンβ受容体や他の性ホルモン受容体異性体のリガンド結合特性も検討されている。 カットオフ値は分析法に従って報告されるべきである。 また.レセプターレベルは年齢に依存するため.年齢別のレセプター分布を報告することを推奨している機関もあります。
CA15-3
CA15-3は.MUC-1と呼ばれる高分子ムチン（糖タンパク質）で.乳がんの肝臓への転移巣から分離した腫瘍膜の精製抽出物をモノクローナル抗体（クローンDF3）および抗ヒト脂肪球抗体（クローン115D8）で確認されたものです。 乳癌のムチン系腫瘍マーカーには，BR27.29，CA-549，MCA，CA-M26，CA-M29がある。 これらのムチンの感度や特異度はほぼ同じであり，複数のムチン系腫瘍マーカーを使用しても，より多くの情報は得られない。 の診断を行います。
臨床応用
乳がん転移の検出には.これまでカルキノエンブリオニック抗原（CEA）が用いられてきましたが.近年の多くの研究成果により.CA15-3の相対的な優位性が確立されています。 つまり.CA15-3値は患者の臨床状態や腫瘍治療に対する反応性と相関があり.現在では転移性乳がん患者の60〜80％の評価に使用されているのです。 本研究の結果は.CA15-3腫瘍マーカーが乳がん患者の治療中の進行・退縮のモニタリングに使用できることを示唆しています。EGTMガイドラインでは.臨床検査の感度を高めるために.CA15-3とCEAの両方を使用することを推奨しています。 いくつかの研究グループは.臨床の場でCA15-3とCEAの両方を使用することで.CA15-3単独よりも早期再発腫瘍の患者を多く検出できると報告している。 腫瘍患者の肝転移や骨転移の早期発見は.連続した腫瘍マーカーを使用することでより感度が高くなり.腫瘍の早期診断は患者の治療と生存の両方にとって最も重要なことである。 現在.CA15-3は主に乳がんの活動性をモニターするために使用されています。 今後は.治療や予後の経過観察におけるCA15-3の臨床的意義についてガイドラインを作成する必要があります。
分析試験準備と試料保管
CA15-3は4℃.24時間安定です。 血清は.再検査のために-20℃（短期）または-70℃（長期）で保存することが推奨されます。 長期保存の場合.変性ゲルは使用しないで下さい（CA15-3は変性ゲルの存在下では著しく不安定です）。
分析時の注意事項
各検査施設は.CA15-3の分析方法.分析精度.基準値の範囲などを検証し.臨床診断のためのカットオフ値を決定する必要があります。
解析後の結果報告に関する留意点
健常者と乳癌患者のCA-153発現に対する性別.人種.年齢.閉経状態の影響を確認し.腫瘍マーカーの基準値範囲に関する文献を作成するために.さらなる研究を行う必要がある。
br27.29 (ca27.29)
BR27.29は.ムチン抗原（MUC-1）が産生する異なるタイプの抗体で.新たに開発されたムチン系乳がん腫瘍マーカーファミリー（CA15-3を含む）のメンバーです。BR27.29モノクローナル抗体とCA15-3の解析に用いたDF3抗体の反応配列は抗原決定基クラスターのマッピングで重複しており.CA15-3の解析に用いたDF3抗体は抗原決定基クラスターのマッピングで重複しており.CA15-3の解析は.抗原決定基のマッピングで重複しています。
臨床応用
BR27.29を乳がんの検出や診断に利用する研究は数多く行われています。 CA15-3同様.BR27.29も乳癌のルーチン・スクリーニングに使用できるが.感度.特異度とも不十分である。 BR27.29はCA15-3より感度は高いが特異度は低いとする報告もある。結論として.BR27.29の値は.再発リスクの高い乳がん患者の再発評価や.進行した患者の病状の進行をモニターするために.多くの施設で使用されています。 これらの応用研究は.BR27.29レベルが腫瘍の活動性を反映していることを示唆し.進行した腫瘍の転移を有する患者のスクリーニングのための臨床的な証拠を提供するものです。 BR27.29は.ステージIIまたはIIIの乳がん患者における病気の再発を予測するために使用されることが報告されています。 また.最近の研究では.BR27.29の値は.骨格系疾患を有する乳がん患者の腫瘍骨転移を予測できることが示唆されている。
分析前の注意点と試料の保存について
BR27.29はグリコーゲン含有抗原であるMUC-1ファミリーのメンバーであるため.処理済みの血清または血漿を用いて他の腫瘍関連抗原と同様に測定することができるが.分析中の抗体の酵素切断を主に考慮する必要がある。BR27.29の測定には.新鮮な分離血清試料を使用します。試料は4℃で24時間安定ですが.安定性を確保するため.再検査の際には-20℃（短期）および-70℃（長期）で保存することが推奨されます。 BR27.29の安定性に及ぼす凍結融解の影響については.さらなる検討が必要である。
分析時の注意事項
BR27.29 の分析法.精度.基準値の範囲.臨床診断上のカットオフ値は.各検査施設で検証し. BR27.29 分析検査の感度.特異性は.臨床仕様に適合している必要があります。一般的に使用されている分析用マトリックスのBR27.29分析試験への影響については報告されていないが.さらに調査する必要がある。 分析法の感度に関する研究は.重点的に品質管理を行う必要がある。 BR27.29 の標準試料を確立し.試験結果を評価するための社内品質管理として使用することが推奨される。
分析後の結果を報告する際の注意点
BR27.29の臨床応用は.さらなる病変を有する乳がん患者のフォローアップに限定することを結果報告書に明記することが望まれる。
乳がん腫瘍マーカーの臨床使用に関するNACBとEGTMの推奨事項
1. エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体の状態は.乳がん患者がホルモン療法（例：タモキシフェン）に反応しているかどうかを判断するために用いられる。ASCO（米国臨床腫瘍学会）の臨床実践ガイドラインでは.閉経前後の乳がん患者の初診時にこれらの受容体のレベルを定量化すべきであると合意している。 免疫組織化学的分析は.生検組織のサンプルサイズでは受容体の定量化が不可能な場合にのみ行うべきである。 新鮮な組織が入手できない場合.パラフィン包埋組織を免疫化学的分析に使用することもできる。
2.エストロゲン及びプロゲステロン受容体レベルが抽出タンパク質30～35 fmol/mgの場合.臨床治療計画の策定に必要な総インプレシジョンは10～20％であるが.抽出タンパク質100 fmol/mg超の場合.判定に必要な総インプレシジョンは30～40％である。
3.ASCOの臨床実践ガイドラインでは.転移性乳癌の閉経前後の患者さんに対して.臨床治療計画の立案を支援するために.エストロゲン受容体とプロゲステロン受容体の定量的測定を実施することが推奨されています。 免疫組織化学的解析は.生検組織で定量的な受容体検査ができない場合にのみ実施する必要がある。
4.治療後無症状であるII期.III期乳癌患者の再発の早期診断には.CA15-3またはBR27.29の測定が重要である。 乳がん患者におけるCA15-3値の高値は.腫瘍の転移の存在を示しています。
5.循環血中CA15-3濃度の減少は.治療に対する良好な反応を示し.CA15-3濃度の持続または上昇は.疾患の進行または治療に対する反応不良を示します。 従って.乳癌患者の臨床状態をフォローするためにCA15-3を使用することが推奨されます。 さらに.EGTMでは腫瘍の転移を早期に診断するためにCEAの検査を併用することを推奨しています。
6.CA15-3値の上昇は.他の悪性疾患や非悪性疾患でも見られるため.ASCO臨床実践ガイドラインでは.CA15-3単独で乳がんの診断・判定に用いるべきでないとしています。
7.BR27.29の臨床的な使用は.更なる病変を有する乳がん患者のフォローアップに限定される。8.CA15-3検査は.血清分離後すぐに行うこと。 血清サンプルは4℃で保存した場合.24時間安定です。 血清は.再検査のために-20℃（短期）または-70℃（長期）で保存することが推奨されます。 長期保存が必要な場合は.分離液を使用しないで下さい（CA15-3 は分離液の存在下では著しく不安定です）。
新たに発見された乳がんマーカー
上皮細胞成長因子受容体
EGF受容体タンパク質は.EGFに結合する細胞外領域.細胞質膜に固定する膜貫通部分.ATP結合部位とチロシントランスアミナーゼキナーゼ活性を示す内部領域を持つ複合分子である。EGF受容体は.特定の乳がん.子宮がん.卵巣腫瘍に存在し.放射性同位元素を含むEGFと結合することにより検出されます。 放射性同位元素で標識されたEGFは高価であるため.多くの研究室は特異的結合能とEGF親和性の両方を検出するリガンド競合アッセイの使用を好んでいる。 乳がん生検検体におけるEGF受容体の過剰発現（＝数の増加）は.無症状期間の短縮および患者の全生存期間の短縮と強く関連しています。 ステロイドホルモン受容体とは異なり.乳がん生検検体中のEGF受容体の高値は.予後不良の指標となる。 EGF受容体の使用はASCO臨床実践ガイドラインには含まれていませんが.EGF受容体は予後因子として.またEGF受容体陽性乳癌の治療用新薬に対する試験反応性の予測因子として.ますますその価値を高めてきています。
HER-2/neu (c-erb B2) 腫瘍性タンパク質
neu癌遺伝子は.もともとマウスの神経芽腫から単離され.チロシンアミノトランスフェラーゼキナーゼ活性とEGF受容体と類似した構造を持つ「p185neu」と名付けられた185kDaの表面糖タンパク質をコードしています。 様々な分子の特性や染色体局在の研究により.EGF受容体とp185neuの区別が明らかになった。p185neuの天然リガンドは.多くの研究室で注目の研究対象になっている。ヒトc-neu遺伝子のホモログであるc-erb B2という遺伝子は.ヒト乳癌から増幅（コピー数の増加）され.無症状期間の短縮や全患者生存率の低下と関連していると報告されています。 c-erb B2はHER-2/neuとしても知られています。 1997年.ASCO委員会は.乳がん患者の管理についてc-erbB2（HER-2/neu）遺伝子の増幅および過剰発現を推奨するには.利用可能なデータが十分でないと結論づけた。 c-erbB2(HER-2/neu)の分析試験結果の臨床応用を評価する際の理論的困難さは.分析方法の高いばらつきと国際的に認められた基準製品の欠如に起因しています。 ASCO2000の最新版では.初診時の原発性乳がん患者および再発患者において.HER2/neuおよびHER2/neu遺伝子の増幅の検査が有用であることが推奨されています。 ASCO2000正誤表の新版には.腫瘍タンパク質アッセイに関する情報.トラスツズマブR治療の指針.化学療法の選択.治療効果の評価への検査結果の利用も含まれています。 HER2/neu 腫瘍タンパク質アッセイは.腫瘍抽出物または循環細胞外領域を用いて実施することができるが.予後を目的としたアッセイは推奨されない。
ヒストンD
ヒストンDは酸性リソゾームプロテアーゼであり.すべての細胞に存在する。 ヒストンDは乳癌と正常乳房で同様に異化され.52KDaの前駆物質で.培養乳癌細胞ではエストロゲンを介して分泌される。 プレヒストンDは.リン酸化糖タンパク質で.それぞれ48kDa.34kDa.14kDaの3つの分子量に分解され.それらに対するモノクローナル抗体が開発され.ラジオイムノアッセイキットの製造に使用されています。 乳がん抽出物中のヒストンDの分析には.酵素免疫測定法（EIA）や酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）のキットも開発され.使用されています。 リンパ節転移陰性乳癌患者におけるヒストンDの過剰発現は.無症状期間の短縮および全生存期間の短縮と関連しているというエビデンスがあります。 しかし.ASCO委員会は.乳がん患者さんの治療にヒストンDを使用することを推奨するには.入手可能なデータでは不十分であると考えました。
ウロキナーゼ型フィブリノゲン活性化因子とその受容体・阻害剤について
ウロキナーゼ型フィブリノゲンアクチベーター（uPA）および組織型フィブリノゲンアクチベーター（tPA）は.フィブリノゲンを線溶酵素に変換する機能を有するセリンプロテアーゼである。 生理的・病理的な状況における細胞の移動と組織の再構築において.tPAは主に血管内血栓溶解に関与し.uPAは周皮細胞のタンパク質分解を媒介する。uPAの酵素前駆体（pro-uPA inactive）は細胞から分泌され.細胞表面でその受容体（uPAR）と結合します。 活性型のpro-uPAは分子量が大きく（MW=52,000）.ジスルフィド結合した2本のポリペプチド鎖［A鎖（アミノ酸数158.MW=32,000）.B鎖（アミノ酸数253.MW=20,000）］から構成されています。 000)] 活性化されたuPAは.フィブリノーゲンを線溶酵素に変換する。 線溶酵素は.細胞外マトリックスに存在する様々なタンパク質（侵入性または移動性）の分解を触媒する.幅広いスペクトルを持つプロテアーゼである。 正常細胞や腫瘍細胞が産生するフィブリノーゲンアクチベーターインヒビター（PAI-1.PAI-2）は.その受容体に結合してuPAの活性を阻害する。がんでは.uPAは腫瘍細胞の浸潤を媒介する。 多くの腫瘍（乳がん.卵巣がん.子宮がん.子宮頸がん.前立腺がん.腸がん等）の組織抽出液中のuPA.PAI-1.PAI-2レベルの評価が報告されています。 uPA.PAI-1.PAI-2がすべて同じ生検標本で過剰発現している場合.疾患の再発や患者の全生存期間の短縮を正確に予測することができます。臨床に使用する生体診断指標としてのuPAとPAI-1は.標準化したELISA測定法と安定した標準製品の開発がさらに必要です。